Leçon e : LES ACIDES NUCLEIQUES

2. Les méthodes des colorants (test de Feulgen et de Brachet)

Ces méthodes permettent de mettre en évidence la localisation des acides nucléiques.

• Test de Feulgen : mise en évidence de l'ADN

L'ADN est le constituant essentiel de la chromatine. Sa coloration par la méthode de Feulgen se fait en deux étapes :

Etape1 : on hydrolyse partiellement l'ADN en présence d'acide chlorhydrique dilué. L'hydrolyse libère un sucre réducteur à fonction aldéhyde : le désoxyribose.

Etape2 : ensuite, on traite au réactif de schiff ; le désoxyribose fait apparaître une coloration rouge.

Ce sucre n'existe que là où était l'ADN qui a été hydrolysé, c'est-à-dire au niveau du nucléoplasme.

• Test de Brachet : distinction de l'ADN et de l'ARN

On traite une cellule avec le colorant d'Una, un mélange de vert de méthyle et de pyronine. Le vert de méthyle colore l'ADN en vert et la pyronine colore l'ARN en rose. On compare cette cellule témoin colorée avec ce mélange avec des cellules traitées préalablement avec des enzymes hydrolysant (digérant) : l'ADNase et l'ARNase ensuite colorées.

On réalise 3 préparations microscopiques que l'on colore avec le test de Brachet auquel on associe l'ADNase, l'ARNase.

• La préparation ne subit pas de traitement préalable avant coloration : on constate que le cytoplasme et le nucléole sont colorés en rose et le la chromatine en vert. (Cellules témoins) ;

• La préparation est d'abord traitée à l'ARNase avant coloration : seule la chromatine se colore en vert ; le cytoplasme et le nucléole restent incolores ;

• La préparation est préalablement traitée à l'ADNase et ensuite colorée : seuls le nucléole et le cytoplasme sont colorés en rose ; la chromatine reste incolore.